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原核表达与纯化

原核表达与纯化服务

服务描述:

大肠杆菌表达系统是目前最常用,也是最经济实惠的蛋白表达系统,与其他表达系统相比具有遗传背景清楚,目的基因表达水平高,培养周期短,抗污染能力强等特点,是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。本公司的大肠杆菌表达平台可为您提供全方位的重组蛋白生产服务,在表达包括可溶性蛋白、包涵体、融合蛋白等方面,拥有丰富的经验和专业技术,能解决蛋白表达过程中的各种瓶颈问题。

新葡萄京官网8814优势:

HisGSTMBPStrepFLAG等标签多种表达方式同时进行,确保获得最优质的蛋白。

保证蛋白为普通缓冲可溶。

纯化的蛋白经过ELISAWestern-blot,或者其它生物活性验证。

可提供详细的表达纯化条件,实验数据以及菌株。

该服务根据客户构建好的表达载体,并参考客户提供的实验方案,如温度、IPTG诱导浓度及表达时间,选择合适的E.coli菌株进行目的蛋白诱导表达并纯化。如果客户还没有构建好表达载体,我们也可以帮您将目的基因插入到特定的表达载体中,并摸索蛋白表达的最优条件。各项服务需额外加付少许费用。表达出的目的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。

具体内容:

服务步骤

具体内容

交付内容

交付时间

目标基因亚克隆 (可选)

1.扩增并抽提含有目的基因的载体质粒。

   2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒。包括IPTG,阿拉伯糖,热休克,冷休克诱导方式,GSTStrepMBPHisHAFlagmyc等融合标签载体的构建。

3.测序验证构建质粒的准确性。

正确构建的重组表达质粒,含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

2-3

E. coli表达菌株转化及筛选

1.扩增并抽提构建好的表达质粒。

2.将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。

3.至少挑选3个阳性克隆于LB培养基中扩增并选择合适的条件,SDS-PAGE 检测蛋白表达情况,筛选出合适菌株。

重组质粒的表达菌株及表达检测报告。

2-3

目的蛋白的诱导表达及纯化

1.对蛋白表达时间,温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化,并诱导表达目的蛋白。

2.摇瓶培养1L重组细菌,通过亲和层析,离子交换,疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。

3.可根据需求利用蛋白酶去除不需要的纯化标签(可选,注:构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点),再纯化获得所需的目的蛋白。

4..SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。

≥1mg纯化好的目的蛋白及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白,纯度最高可达95%以上。

2-3

包涵体复性

蛋白诱导表达与包涵体纯化
数百种缓冲条件快速筛选最佳复性缓冲,采用稀释复性,透析复性,柱层析复性等多种技术获得纯度大于90%的包涵体。

大于1mg目的蛋白

2-3

中试工艺研究

5~30L高密度发酵,大规模纯化,冻干,对外服务。

能够完全重复的中试放大工艺。

协商